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NFAT Luciferase Reporter Jurkat T Stable Cell Line

NFAT熒光素酶記錄Jurkat T穩(wěn)定細(xì)胞系

描述： 

NFAT響應(yīng)性熒光素酶報(bào)告基因Jurkat T穩(wěn)定細(xì)胞系來(lái)自人T淋巴細(xì)胞，并在NFAT響應(yīng)元件的控制下穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因。該細(xì)胞系是用于監(jiān)測(cè)由刺激治療，強(qiáng)制基因表達(dá)和基因敲除引發(fā)的鈣信號(hào)通路的激活的理想細(xì)胞模型。

原理

NFAT是轉(zhuǎn)錄因子家族，在免疫反應(yīng)以及心臟，骨骼肌和神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中起重要作用。NFAT受鈣信號(hào)調(diào)節(jié)。通過(guò)磷酸酶鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的鈣激活，NFATc蛋白從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，與其他蛋白質(zhì)配合以介導(dǎo)基因表達(dá)。NFAT的核進(jìn)口被PKA和GSK3等激酶阻斷。NFATs也涉及乳腺癌。Signosis已經(jīng)建立了已經(jīng)用NFAT-熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)建體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NFAT熒光素酶報(bào)道細(xì)胞系。通過(guò)熒光素酶的分析，細(xì)胞系可用于監(jiān)測(cè)由刺激，復(fù)合治療，強(qiáng)制基因表達(dá)或基因敲低引發(fā)的NFAT活性的細(xì)胞變化。  

通過(guò)使用含有NFAT結(jié)合位點(diǎn)，螢火蟲(chóng)熒光素酶編碼區(qū)上游的zui小啟動(dòng)子以及潮霉素表達(dá)載體，然后潮霉素選擇的pTA-NFAT-熒光素酶報(bào)道載體轉(zhuǎn)染建立細(xì)胞系。隨后對(duì)潮霉素抗性克隆進(jìn)行PMA +離子霉素誘導(dǎo)的熒光素酶活性篩選。

TF熒光素酶報(bào)告原理。  TF熒光素酶報(bào)道穩(wěn)定細(xì)胞株利用人工啟動(dòng)子構(gòu)建體來(lái)驅(qū)動(dòng)熒光素酶表達(dá)。啟動(dòng)子區(qū)域可以由順式元件TF結(jié)合位點(diǎn)的多個(gè)重復(fù)序列，來(lái)自已知TF下游基因的啟動(dòng)子區(qū)域的DNA片段或含有推定/已知的TF結(jié)合位點(diǎn)的DNA片段組成。TF可以通過(guò)細(xì)胞外刺激或通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑激活幾種方式。一旦激活，TF易位于細(xì)胞核，并經(jīng)常與相關(guān)因子相互作用以驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)。一旦熒光素酶表達(dá)，其可以在酶測(cè)定中產(chǎn)生光，并且測(cè)量的光量與TF活化的水平正相關(guān)。

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